Pamakéan sarta precautions of ultrafiltration centrifuge tube
1) Pilih tabung ultrafiltrasi anu cocog.Catet yén mémbran UF bénten dina tingkat kasabaranna kana sababaraha bahan kimia.Biasana, tabung ultrafiltrasi kalayan potongan beurat molekular 10 kDa tiasa dipilih kalayan potongan beurat molekular anu henteu kedah langkung ageung tibatan 1/3 tina beurat molekul protéin anu dipikaresep, sapertos 35 kDa.Upami beurat molekul protéin anu dipikaresep sakitar 10 kd, tabung ultrafiltrasi kalayan potongan beurat molekular 3 KD tiasa dianggo.
(2) The ultrafiltration, Freshly dibeuli, geus garing, kalawan cai ultrapure ditambahkeun saméméh pamakéan sarta cai sagemblengna dialirkeun mémbran, és mandi atawa kulkas tos leuwih tiis pikeun sababaraha menit.Cai lajeng dituang kaluar, nyaéta cairan protéin, jeung sabaraha ditambahkeun, whichever teu leuwih ti garis bodas di luhureun tabung.Operasina hampang, sareng tabung ultrafiltrasi kedah ditiiskeun dina és sateuacan nambihan solusi protéin.
3) Boh massa jeung puseur gravitasi éta pikeun ngahontal kasaimbangan.Catet yén laju rotasi sareng akselerasi henteu gancang pisan, upami henteu langsung ngarusak mémbran ultrafiltrasi.Ultrafiltration centrifugal dimimitian (centrifuge precooled ka 4 derajat).Saatos RPM tina centrifuges béda ieu dirobah jadi g, éta béda.Akselerasi centrifuge disaluyukeun ka minimum, ngurangan tekanan dina mémbran.Catetan, pastikeun ninggalkeun centrifuge sanggeus centrifuge geus ngahontal speed tujuanana, atawa lamun boga masalah, anjeun moal bisa nanganan eta pikeun kahiji kalina.Orientasi mémbran ka spindle disaluyukeun nurutkeun parentah (kasus centrifuge sudut nyaéta mémbran jeung sumbu jejeg).Dina pamakéan praktis, laju rotasi umum leuwih handap ti éta dina parentah, ku kituna umur tube centrifuge bisa diperpanjang.
3) Boh massa jeung puseur gravitasi éta pikeun ngahontal kasaimbangan.Catet yén laju rotasi sareng akselerasi henteu gancang pisan, upami henteu langsung ngarusak mémbran ultrafiltrasi.Ultrafiltration centrifugal dimimitian (centrifuge precooled ka 4 derajat).Saatos RPM tina centrifuges béda dirobah jadi g, éta béda.Akselerasi centrifuge disaluyukeun ka minimum, ngurangan tekanan dina mémbran.Catetan, pastikeun ninggalkeun centrifuge sanggeus centrifuge geus ngahontal speed tujuanana, atawa lamun boga masalah, anjeun moal bisa nanganan eta pikeun kahiji kalina.Orientasi mémbran ka spindle disaluyukeun nurutkeun parentah (kasus centrifuge sudut nyaéta mémbran jeung sumbu jejeg).Dina pamakéan praktis, laju rotasi umum leuwih handap ti éta dina parentah, ku kituna umur tube centrifuge bisa diperpanjang.
(4) Nalika konsentrasi kana 1ml sésana, nyandak 50ul solusi panyangga, tambahkeun 10ul aliran ngaliwatan tur tingal lamun aya wae warna biru, salaku judgment naha tube ultrafiltration leungit protéin.Upami tabung bocor, tuang deui lapisan luhur sareng ngalir kana tabung énggal pikeun ngamimitian ultrafiltrasi.Pikeun nangtukeun persis lamun tabung anu lasut, centrifuge pikeun 10min jeung 5mgml of BSA saméméh flowthrough, ngajalankeun on lem protéin, atawa Bradford assay atah, terus ku nambahkeun sésana solusi protéin kentel (anu beroperasi dina és jeung nyegah protéin tina pemanasan) nepi ka kabéh konséntrasi geus ditambahkeun.Jaga salila centrifugation lamun présipitasi protéin lumangsung, ngarah kana panutupanana tube.Upami présipitasi kajantenan, tangtoskeun naha panyabab khusus tina présipitasi nyaéta konsentrasi protéin anu kaleuleuwihan atanapi panyangga anu teu pantes;Urut bisa direngsekeun ku ultrafiltration sababaraha tabung ultrafiltration sakaligus, nurunna konsentrasi, sarta dimungkinkeun ku exchanging solusi panyangga béda nepi ka euweuh présipitasi protéin lumangsung.
(4) Nalika konsentrasi kana 1ml sésana, nyandak 50ul solusi panyangga, tambahkeun 10ul aliran ngaliwatan tur tingal lamun aya wae warna biru, salaku judgment naha tube ultrafiltration leungit protéin.Upami tabung bocor, tuang deui lapisan luhur sareng ngalir kana tabung énggal pikeun ngamimitian ultrafiltrasi.Pikeun nangtukeun persis lamun tabung anu lasut, centrifuge pikeun 10min jeung 5mgml of BSA saméméh flowthrough, ngajalankeun on lem protéin, atawa Bradford assay atah, terus ku nambahkeun sésana solusi protéin kentel (anu beroperasi dina és jeung nyegah protéin tina pemanasan) nepi ka kabéh konséntrasi geus ditambahkeun.Jaga salila centrifugation lamun présipitasi protéin lumangsung, ngarah kana panutupanana tube.Upami présipitasi kajantenan, tangtoskeun naha panyabab khusus tina présipitasi nyaéta konsentrasi protéin anu kaleuleuwihan atanapi panyangga anu teu pantes;Urut bisa direngsekeun ku ultrafiltration sababaraha tabung ultrafiltration sakaligus, nurunna konsentrasi, sarta dimungkinkeun ku exchanging solusi panyangga béda nepi ka euweuh présipitasi protéin lumangsung.
(5) Sababaraha léngkah munggaran dipaké pikeun konsentrasi protéin, sarta lamun panyangga bakal dirobah, gently nambahkeun panyangga anyar (ultrafiltration ngaliwatan mémbran ultrafiltration 0.22um) kana ngeunaan 1ml total protéin, sarta reconcentrate kana ngeunaan 1ml salila tilu. kali padeukeut, kalawan volume final kentel final gumantung kana konsentrasi protéin nu dipikahoyong, umumna teu leuwih ti 500ul, tapi ogé dina 200ul.Ngahontal 1000 × atawa leuwih dina tilu kali, dasarna saloba parobahan panyangga, sakumaha diitung ku sahenteuna 10 × atawa leuwih volume pengayaan unggal waktu.
(5) Sababaraha léngkah munggaran dipaké pikeun konsentrasi protéin, sarta lamun panyangga bakal dirobah, gently nambahkeun panyangga anyar (ultrafiltration ngaliwatan mémbran ultrafiltration 0.22um) kana ngeunaan 1ml total protéin, sarta reconcentrate kana ngeunaan 1ml salila tilu. kali padeukeut, kalawan volume final kentel final gumantung kana konsentrasi protéin nu dipikahoyong, umumna teu leuwih ti 500ul, tapi ogé dina 200ul.Ngahontal 1000 × atawa leuwih dina tilu kali, dasarna saloba parobahan panyangga, sakumaha diitung ku sahenteuna 10 × atawa leuwih volume pengayaan unggal waktu.
waktos pos: Nov-09-2022